广西亲子鉴定机构专家讲述STR变异类型的验证

作者：中正鉴定 发布时间：2014-10-16 00:00:00 人气：482

 
    STRGA包括了Aw、A删和LOH三种变异类型，对此三种类型的变异采用广西亲子鉴定机构实验室常用的单位点扩增后测序验证。

    主要步骤为以下4点：

1．Identifiler系统15个STR基因座和AMEL基因座的单位点引物扩增

    20个基因座单位点扩增引物，优化扩增条件见。以广西亲子鉴定机构标准DNA 9947A为模板，采用单位点引物所示扩增体系进行扩增，其凝胶电泳图。

2．采用标准品DNA(9947A)对所建立的单位点扩增系统的j序效果进行验证

    表12-7所示为标准品DNA (9947A)的Identifiler 15个STR基因座的基因型。选取部分位点(D8S1179、THOI及最为复杂的D21S11)以9947A为模板进行PCR扩增，产物纯化后克隆测序对所建立的体系进行验证，每一基因座测序克隆不少于5个。为测序图谱，图谱示各STR基因座测序分型正确。

3．对STRGA的测序验证

    随机选取10例部分出现STRGA变异的肿瘤组织样本，采用所建立的单位点扩增体系扩增纯化后，进行克隆测序，以验证检出的STRG^变异的准确性。10
例肿瘤组织样本的STRGA变异涵盖了A~y,、A-dd和LOH三种类型，经克隆测序证明依据ID。

    对于pLOH，由于杂合子的两个等位基因电泳时仍均可检出，故本研究中采用S;inofiler试剂盒进行了验证。第20号样本的正常组织和肿瘤组织样本分别为同一个体的正常组织和结肠癌肿瘤组织，应用Identifiler试剂盒检测在D8S1179基因座、FGA基因座中均出现两等位基因的不均衡扩增现象。采用广西亲子鉴定机构Sinofiler试剂盒进行验证时，D8Sl179和FGA两个基因座图谱表现与Identifil-er系统相似。采用本研究所验证的pLOH判断标准均认定肿瘤中出现pLOH变异。entifiler试剂盒的分型结果判定肿瘤组织的STRGA变异类型均正确无误。为STRGA变异中最为复杂的一种类型，即Aad(样本编号为26，基因座为CSFIPO)，分别为该样本CSFIPO基因座的三个等位基因(10，11，12)的克隆测序结果。