DNA鉴定酰胺凝胶银染法操作注意事项 常见问题

作者：中正鉴定 发布时间：2014-03-08 00:00:00 人气：519

DNA鉴定酰胺凝胶银染法操作注意事项有哪些？鉴定专家为你揭晓：

(1)须用无核酸酶的去离子水稀释引物，否则引物会降解。
(2)玻璃板要清洗干净，以防灌胶时产生气泡，长玻璃板要硅化彻底，否则胶容易粘在饭上。涂有粘胶剂的玻板要涂抹均匀，否则腔与玻板结合不牢固丽剁落下来。按电泳槽说明书安装好灌胶架、玻璃板的底角保持平整。
(3)灌好胶后立即插入梳子，勿使梳齿下留有气泡。
(4)胶在显色液中时间太长或聚丙烯酰胺凝胶的质量不好会引起胶黄或背景太深。解决的方法是，加显色液前在倒掉硝酸银时将其甩干，放人无离子水中使胶板的正面和背面都洗干净，使用高质量的聚丙烯酰胺凝胶。
(5)聚丙烯酰胺凝胶的质量不好，或电泳温度太高，或样品量太多会使带模糊。解决的方法是，使用高质量的聚丙烯酰胺凝胶，胶溶液应贮存在棕色试剂瓶中。电泳温度控制在40。60℃，减少样品量。
(6) STR基因座重复序列较短，各等位基因片段长度差异小，相邻等位基因片段有时难以辨别，横向比对有时易产生偏差，再加上边缘效应或谱带漂移也会引起等位基因片段分型出现误差，因此要求每隔3个待检样品加一等位基因分型标准物，并且外侧的两个泳道也都加等位基因分型标准物。
(7)某些基因座的扩增产物变性后的二条单链由于碱基组成有差异，构象有所不同，在凝胶电泳中电泳迁移率不同，在凝胶图谱上表现为一个等位基因有2条带，会干扰结果判读。   
(8)硝酸银溶液处理凝胶后，洗胶时间超过20s，结合在DNA上的银被洗掉了，染色太浅，使DNA谱带模糊或无条带。
(9)染色液或显色液分解，谱带染成黄棕色，背景呈黑灰色。
(10)显色液温度过高，显色时间过长，造成染色背景太高。
(11)在银染步骤摇动不均匀，或在显色前的漂洗步骤不当，胶表面出现黑色的漩涡状图案。因此，亲子鉴定实验在染色时必须轻轻摇动，在加显色液前用超纯水漂洗20s。
(12)长胶板被粘合剂污染或硅化液处理不彻底，胶粘在两玻璃板之间。桂林亲子鉴定从短板上擦去多余的粘合剂，小心不要污染长板，放置时与长玻璃板开；彻底硅化长玻璃板。